Culture de diatomées


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Culture de diatomées

Messagede Ferran » 08 Juil 2013 00:06

Depuis un certain temps, j’essaye cultiver des éspeces déterminées de diatomées en milieux artificiel avec la fin d’essayer une étude de la cytologie de ces algues, à un niveau élémentaire accessible à un amateur.
Le milieu de culture adoptée, est le d'Erdschreiber, pour leur facilité de préparation et qui se compose de 50 ml d'extrait de terre, 0.1 g de nitrate sodique, 0.05 g de monophosfate sodique et 0.5 ml de solution de silicate sodique, complétant jusqu'à 1000 ml avec eau désionisée. Il est stérilisé à 90º.
Pour faire des inoculations en milieu solide, en plaques de Petri, nous ajoutons 1.5% d'agar et nous chauffons à 80º jusqu'à la dissolution de l'agar.

D’un étalage d’eau d’un étang, assez riche en Fragilaria, j’ai “pêché” avec une pipette Pasteur, cinq exemplaires de Fragilaria ulna et je les ai inoculé, en une boite de Petri, avec 20 ml de milieu de culture. Deux semaines passées le développement de la diatomée a été suffisant pour faire les premiers essais de tinció du noyau (1) et reinoculer en un système de culture en continuum, avec lente entrée de milieu nouveau et sortie du milieu excédant, qu'il permet de retirer des étalages à traiter, sans interrompre la croissance au tank de culture.
Inoculant en plaques avec substrate sòlide de agar, sont obtenues des colonies de Fragilaria qui peuvent être reinocules, comme matériel de réserve.

En une occasion le tank de culture en continuum, il s'est pollué avec une espèce de Nitzschia, de mesure très petite et j'ai eu de commencer à nouveau la culture.
À l'heure actuelle au tank, une cyanobactérie est développé, qui n'interfère pas avec la croissance de Fragilaria et qu'il faut tolérer.

(1) viewtopic.php?f=90&t=13005

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Re: Culture de diatomées

Messagede André » 08 Juil 2013 18:45

Bonjour Ferran

Je suis impressionné par ce résultat et donc par tes essais !

Cela ouvre pas mal de perspectives : je me rappelle de l'époque où Dominique cherchait des Amphipleura ....en fin de compte tu es en mesure de reproduire n'importe quelle espèce !

Un autre débouché de ton travail serait de mettre en culture une variété d'une espèce donnée et voir si le caractère déterminant se perpétue au niveau de la population ou non ....
Amicalement
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Re: Culture de diatomées

Messagede Ferran » 08 Juil 2013 22:00

Bonjour André:

Je remercie de tes mots d'encouragement, qui faute me fait, puis que je ne suis pas trop sûr de réussir dans ce projet, mais je pense que cela vaut la peine de le prouver.
Par le que j’ai pu lire sur le sujet de la culture des diatos, il semble qu'il n'est pas possible maintenir des lignes de n’importe quelle espèce, il semble être qu'ils sont assez faciles à “dompter”, autres qui présentent certaines difficultés et quelques-unes semble qu'on n'a pas réussi à ce qu'ils se reproduisent en milieux artificiels.
Un des problèmes récurrents, est la difficulté à réussir à ce qu'ils se multiplient par voie sexuelle, et ceci comporte qu'ils diminuent de mesure, jusqu’à arriver au point en ce que les individus arrêtent d’être viables et on éteint la ligne.
Et tu as raison en pensant qu'maintenant quelques espèces en culture, il est peut penser qu'il peut permettre de faire quelques études intéressantes sur la variabilité que peut être observée le long de temps de maintenir en culture une souche d'une espèce déterminée.

Pour le moment j’ai commencé avec la Fragilaria par m’a été facile de séparer quelques individus d’un étalage où ils étaient très abondants et il me sert pour découvrir les points de difficulté de cette technique que je ne connaissais pas et si je vois qu'il est faisable, je commencerai la culture de quelqu’un autre espèce. Si le résultat est un échec, do, rien n'arrive, je continuerai où était.
Amicalement,
Ferran

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Re: Culture de diatomées

Messagede BelialL » 09 Juil 2013 16:14

Bonjour a tous,

Je te félicite aussi pour avoir mis ce protocole en place, c'est du beau travail !

Il n'y a pas trop de problèmes avec les bactéries ?
Le milieu est stérilisé et j'imagine que tu travail sous une flamme mais il doit y avoir quelques bactéries qui arrivent avec le prélèvement des diatomées, la compétition avec celles-ci peut-elle influence le taux de reproduction sexuée ?

L'ajout d'un antibiotique avec le milieu de culture pourrait peut-être donner des résultats encore meilleurs (bien qu'ils semblent déjà très bons ;) ).
Amicalement, Kévin.

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Re: Culture de diatomées

Messagede Ferran » 09 Juil 2013 22:38

Bonjour:
Merci Kevin pour ton message encourageant. Les tiens suggestions sont réussis,
le modus operandi que j'essaye d'utiliser, c'est le normal en bactériologie, en quand à la stérilité de matériel et milieu. La difficulté est l’obtention des cultures libres de germes polluants (bactéries, cyanobactéries, algues vertes, llevures et autres espèces de diatomees); je commence à obtenir de meilleurs résultats appliquant le ensemencement en plaques d'agar successives et choisissant les colonies de Fragilaria à chaque fois plus “nettes”.
J’ai aussi commencés une suite de cultures en plaque, avec milieu qui contient antibiotique, malgré que jusqu’à maintenant, je n'ai pas eu de problèmes avec les bactéries, si que c’est avec l’espoir que il agis (l’antibiotique), sur les cianobacteries. Comme le milieu de culture, il ne contient pas de matière organique, ceci limite, jusqu'à un certain point, la prolifération bactériene.
La croissance de colonies de diatomées, est lente, ils ne se font pas évidents même dégagé de dix ou quinze jours des ensemences, par conséquent, il faut avoir de la patience pour obtenir des résultats.
Je raconterai déjà mes expériences et, à nouveau, je remercie de ton intérêt.
Amicalement,
Ferran

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