Le Naturaliste

Les tetrahymenas sont des protozoaires ciliés bactériotrophes. Ils se nourrissent donc de bactéries, mais ils peuvent aussi se multiplier sur un milieu nutritif liquide (extrait de levure + hydrolysat de protéines). Le milieu nutritif liquide est le choix standard pour la conservation de ces protozoaires.

Voici deux vidéos qui illustrent quelques connaissances que j'ai accumulées avec ces unicellulaires. Je maintiens cette culture de Tetrahymena pyriformis depuis plus de 20 ans. Cela implique forcément des incidents, des observations étonnantes, etc...
Au début, les cultures étaient maintenues entre 12-14 °C et une micro-goutte de suspension était transférée dans le milieu neuf toutes les 2-3 semaines, une bonne pratique étant de toujours garder les 2-3 cultures précédentes afin de pouvoir parer un pépin éventuel. Par exemple, il arrivait sporadiquement que tous les individus d'une culture mouraient - comme un suicide collectif. Ainsi bizarrement, la dernière culture était morte, mais les précédentes - bien plus vieilles - étaient encore vivantes. Les tetrahymenas sécrètent des effecteurs chimiques servant à la communication entre les individus et remplissant d'autres rôles encore obscurs.
Les vieilles cultures sont donc en manque de nutriments (starvation) et les protos vont essayer de survivre par exemple en modifiant leur métabolisme. Il se crée des sous-populations d'individus très petits qui réduisent leur respiration et d'autres plus gros et/ou plus rapides, ce qui pourrait leur permettre d'avaler plus de nourriture et/ou de trouver un meilleur environnement.

C'est l'objet de la première vidéo:


L'on peut se demander si ces phénomènes existent dans le milieu naturel - une éprouvette contenant un milieu nutritif qui s'épuise n'est évidemment pas comparable à un biotope naturel bourré d'autres microorganismes et d'une grande diversité de micro-environnements !

La deuxième vidéo illustre le fait que ces protozoaires recherchent des concentrations d'oxygène différentes selon leur état physiologique. Ils ont besoin de beaucoup d'oxygène quand la nourriture est abondante. En effet, lors de la croissance active, le 30% de la nourriture est utilisée pour la respiration (production d'énergie), alors que seulement le 40% contribue à la croissance et que le 30% restant est excrétée. Lors d'une restriction alimentaire, ils vont rechercher une zone microaérophile et une diminution de leur taille va leur permettre de restreindre leur respiration et ainsi d'économiser la nourriture. D'autres phénomènes encore interviennent, comme la synthèse de protéines spécifiques (starvation proteins), etc...
Ainsi, une culture en tube impliquant un vaste gradient d'oxygène entre la surface et le fond permet une survie d'une année sans repiquage. Par contre, une culture en flacon plat dont la « profondeur » du milieu n'est que de quelques millimètres, mourra après 2-3 ou 4 semaines d'incubation. La culture en tube permet également l'incubation à température ambiante.




Je suis assez fier de ma méthode d'observation en capillaire qui permet d'effectuer facilement des essais de chemotaxie et de galvanotaxie.
Merci de votre attention et si des questions, des rectifications ou des témoignages vous démangent, n'hésitez pas. Nous sommes ici pour échanger et pour apprendre !

Splendide, merci à toi.

Une observation sur du long, très long terme. Great an amazing surprise, thanks a lot .... Non j'ai pas changé de langue, simplement voir ici présenté un résultat de tant de temps d'observation me perturbe et m'émerveille, je t'en remercie très sincèrement.
Merci aussi pour les explications adaptatives, j'aurai quelques questions mais il faut que je réfléchisse pour ne pas dire de bêtises.

Alain

Comme Alain je suis admiratif !
Génial l'observation du capillaire.

Merci de partager avec nous.

Amicalement.

Daniel

Merci pour vos commentaires.
A vrai dire, j'ai déjà appris tellement sur ce forum, concernant les microscopes, la photo, les organismes, etc... etc...,
que je me sens redevable et dois aussi amener quelque chose.
Je pense aussi que de nombreuses contributions / photos qui n’attirent pas les commentaires sont aussi appréciées, et parfois même après plusieurs années. La fonction recherche du forum m'a déjà rendu de grands services.

Je posterai tout bientôt dans la section "technique" ma méthode de prise de vue des capillaires de la deuxième vidéo.

Bravo Bernard !
Ton observation en capillaire est fascinante ! On devrait discuter par MP de l'application des ciliés en biotech
Je maintiens Colpidium colopoda et Colpidium campylum en milieu liquide dans un tube également: volvic + grain de riz
ça n'est pas aussi stérile que les Tetrahymenae mais c'est efficace.

Merci Phil,
Avec la méthode du grain de riz, j'ai souvent eu des problèmes de champignons. Mais maintenant que tu m'y rends attentif, c'est probablement parce que j'utilisais des flacons plats et non des tubes. Dans le tube, le grain va au fond où les conditions sont anaérobies, ce qui va probablement limiter la croissance des champignons.
Les flacons pour culture cellulaire sont très pratiques pour l'observation directe sous le bino ou avec un MO inversé, mais pour la conservation, le tube est certainement une meilleure solution.

Bonjour,
Tout d'abord je vous remercie beaucoup pour ce sujet intéressant, j’ai commencé le travail sur tetrahymena pas longtemps. Je serai amené à la transporté avec moi (un voyage de deux jours). Vu que je suis débutant avec la culture de ce protozoaire je vous demande de m’indiquer la meilleure méthode qui me permet de transporter tetrahymena sans qu’il crève au milieu de la route.
Je compte beaucoup sur votre expérience et vous réponses.
Merci d’avance

Bonjour Karym,
Les tetrahymenas sont costauds, tu ne devrais pas avoir de problème pour un transport de quelques jours.
En supposant que tu as besoin de cultures axéniques, un simple milieu PPY (https://tetrahymena.vet.cornell.edu/recipes.php ) suffira, même sans le FeCl3.
Il faut distinguer la conservation de la production. Pour la conservation il faut utiliser un milieu plutôt dilué (par ex. PPY dil2x), sinon les produits d'excrétions vont être trop concentrés et nuisibles dans le tube. Par contre pour la production des tetrahymenas en haute concentrations, l'on peut utiliser un milieu concentré, mais il faut les récolter ou les diluer dès la fin de la croissance. Évidemment, la température joue son rôle. Les T. thermophila vont survivre à 37 °C mais pas T. pyriformis. Le froid par contre n'est pas un problème. Conclusion: transport entre 4 -27 °C et le milieu ne doit pas geler!
Il faut aussi utiliser un tube en polypropylène avec bouchon à vis comme sur ma vidéo (les tetrahymenas se débrouillent bien sans oxygène) et non un flacon de culture en polystyrène, car ils sont cassants et peuvent fuiter pendant le transport (postal).

Cela serait sympa de nous raconter un peu plus sur tes intérêts et tes projets,... et n'hésite pas s'il te faut plus d'aide.
Cordialement
Bernard

Merci pour ce partage incroyable.

Une petite question : en 20 ans, combien de générations ???

Combien de générations en 20 ans ?,.. heu,.. c'est impossible à dire. Au début nous repiquions toutes les semaines, ensuite toutes les 2-3 semaines et maintenant 1 fois par année. Le milieu a changé, les températures ont varié entre 10 et 24°C selon l'incubateur à disposition et les diverses pannes... Parfois une culture était morte, mais la précédente encore vivante et utilisée pour le repiquage.
Si l'on prend une moyenne d'un repiquage par mois, 20 ans aura exigé seulement 240 manip de 5 min ==> 20h ! C'est pas énorme, tout est relatif !