Préparation du pollen

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Re: Préparation du pollen

Messagede Christian » 07 Avr 2012 18:19

Bonjour à tous,
Bravo pour ces essais !

J'ai cherché chez Brunel et je n'ai trouvé que ce document sur la composition de leur GG non colorée : http://www.microscopysafety.co.uk/glycerinejelly.pdf
(aucune indication sur un conservateur ... cf partie toxicologie)
Je confirme aussi que j'ai des prépa histo-vég de 8 ans, sans conservateur ajouté *, en parfait état (sauf coloration), comme discuté ailleurs ... ;)
(*sauf ceux déjà présents dans les feuilles de gélatines industrielles qui doivent aider !)

Autrement, personne n'a encore essayé avec quelques gouttes d'huile essentielle de thym (Thymus vulgaris) ?
Bon j'ai compris, je ferai chauffer mes fourneaux ! :D
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Re: Préparation du pollen

Messagede Fredlab » 07 Avr 2012 18:37

Hello

Quand j'ai commencé à m'équiper pour faire de la microscopie, j'avais fait une commande chez Begenat et en fait, dans cette commande, j'avais demandé un flacon de gélatine glycérinée.
Bon, j'avais oublié ça :oops:
Je viens de le retrouver... c'est un flacon avec un bouchon compte-gouttes (ce genre)... avec la GG figée dedans. Je suppose que je dois passer tout le flacon au bain-marie pour espérer obtenir une ou deux gouttes de GG :?
Il est indiqué "glycérol = 45% - phénol = 1%... il y a du phénol 8-)
Juste, si on chauffe le flacon pour liquéfier la GG, on évapore les "alcools", non ?
Au bout d'un moment, ça va moins bien marcher.

Sinon, c'est bête, elle n'est pas colorée comme la GG de chez Brunel.
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Re: Préparation du pollen

Messagede Christian » 07 Avr 2012 18:50

Salut Fred,
FredLab a écrit:Je viens de le retrouver... c'est un flacon avec un bouchon compte-gouttes (ce genre)... avec la GG figée dedans. Je suppose que je dois passer tout le flacon au bain-marie pour espérer obtenir une ou deux gouttes de GG :?


Le choix du flacon était peu judicieux. Un petit contenant à couvercle est plus adapté.
Figée c'est normal, en revanche si c'est du béton ... (en principe tu prélèves un petit morceau, etc ... comme le tuto d'André ... donc surtout pas chauffer tout le flacon, à moins de vouloir modifier la formule, comme un ajout de colorant par exemple)

Il est indiqué "glycérol = 45% - phénol = 1%... il y a du phénol

Oui, c'est bien pour la conservation, et t'évite d'acheter + stocker un pot d'acide phénique pur :mrgreen:, mais cela va bouffer les colorations plus rapidement ...

Juste, si on chauffe le flacon pour liquéfier la GG, on évapore les "alcools", non ?
Au bout d'un moment, ça va moins bien marcher.

Il n'y a pas d'alcool dans la GG. C'est un medium à base d'eau (> 50%, selon recette ...)
Une gelée ne peut pas non plus être réchauffée et refigée sans limites, c'est pourquoi on le fait directement sur lame.
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Re: Préparation du pollen

Messagede André » 07 Avr 2012 19:06

Bonsoir à tous
Pour répondre aux questions sur mes secrets en antiseptique , voici la photo du flacon et sa composition, ainsi que la GG préparée et colorée avec différents colorant(fuchsine, astra bleu,vert de méthyl + phloxine,fuchsine)
Il me reste même un flacon avec de la GG obturée avec un cellophane pour confiture : il n'a pas bougé!
antiseptique.jpg
Exif et Meta MicroCartouche antiseptique.jpg (147.47 Kio) Vu 12742 fois

gg.jpg
Exif et Meta MicroCartouche gg.jpg (150.96 Kio) Vu 12738 fois


Edit: Tout ce matériel a plus de 5 ans puisque j'utilise actuellement de la GG Brunel Jelly.
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Re: Préparation du pollen

Messagede toucan » 13 Avr 2012 09:51

Bonjour à tous,

Le printemps à nos portes, j’ai tenté de capturer et de monter quelques pollens de fleurs.

J’ai recueilli un pistil de tulipe et je l’ai placé sur une lame, ensuite une goutte d’alcool à 96° et bien malaxer : j’avais du pollen plus qu’il n’en faut. Puis 3 lavages avec le même alcool.
L’examen au microscope me les montrait des formes bien définies mais avec peu de détails.
31856
pollen_de_tulipe_ref_31856.jpg
Exif et Meta MicroCartouche pollen_de_tulipe_ref_31856.jpg (100.44 Kio) Vu 12638 fois


J’entrepris dès lors de les colorer à la fuschine de Ziel et c’est là que commenceront mes difficultés : Le pollen absorbe fortement le colorant et ceux-ci baignent toujours dans une solution relativement colorée : comment faire disparaître cette solution colorée ?
La durée recommandée est de 2 à 3 min. Oui mais alors comment stopper cette coloration ?
Je n’en n’ai trouvé nulle part la recette.
J’ai à plusieurs reprises mis quelques gouttes d’alcool : cela à très fort perturbé les pollens qui se sont mis à migrer en tout sens et le liquide comportant les pollens s’est répandu sur une large surface de la lame ; à l’aide d’une lame de rasoir j’ai essayé de rassembler tous les pollens vers le centre en pompant avec un papier absorbant la périphérie du liquide tout en perdant pas mal de pollens, mais heureusement j’en avais plus qu’il n’en faut comme je l’ai dit plus haut. Mais quand est-il si j’en avais eu beaucoup moins !
J’ai laissé évaporer le liquide jusqu’à ce que les grains de pollen soient fixés sur la lame mais encore humides, ensuite je les ai inclus dans de l’Aquatex. (de Marcel)
Le résultat est satisfaisant mais les pollens sont assez sombres et la goutte d’Aquatex a aussitôt fait migrer pas mal de pollens vers l’extérieur de la préparation. Et ne sont-elles pas un peu déformées par les traitements?
31810
pollen_de_tulipe_ref_31810.jpg
Exif et Meta MicroCartouche pollen_de_tulipe_ref_31810.jpg (79.72 Kio) Vu 12634 fois


31823
pollen_de_tulipe_ref_31823.jpg
Exif et Meta MicroCartouche pollen_de_tulipe_ref_31823.jpg (81.77 Kio) Vu 12635 fois



J’ai refait le même essais avec l’inclusions dans de l’Euparal après dessiccation complète à l’alcool : c’est plus lent et cela a tendance à déformer me semble-t-il les grains de pollen, non pas dû au médium mais à la dessiccation.

J’ai alors entrepris un autre essais pour réduire l’intensité de la coloration à la fuschine.
J’ai utilisé de l’acide chlorhydrique à 10%. (recommandé pour réduire la coloration avec la fuschine) Cela fonctionne très bien, mais de nouveau comment arrêter le processus ?
Laver comment ? Avec de l’eau ou de l’alcool ?
Les grains de pollen ne sont pas fixés à la lame et migrent en tout sens si on ajoute de l’eau. Il faut pomper le liquide, les pollens s’en vont…
Il faut éliminer les traces d’acide sinon comment se comportera la coloration à long terme après l’inclusion.
Enfin après quelques gouttes d’eau et d’alcool, le séchage et l’inclusion. L’ensemble est bien éclairci.(Peut-être pas très régulièrement!) Mais comment se maintiendront les couleurs ?
31889
pollen_de_tulipe_ref_31889.jpg
Exif et Meta MicroCartouche pollen_de_tulipe_ref_31889.jpg (126.18 Kio) Vu 12628 fois


J’ai refait un montage de pollen d’anémone mais celui-ci est raté. Probablement plus fragile.
Ce pollen est plus petit et il absorbe plus le colorant, donc est trop foncé.
Il n’a pas supporté la dessiccation avant l’inclusion dans l’Euparal et s’est complètement déformé au séchage.

Vos commentaires sont les bienvenus en tenant compte toutefois que je n’ai pas envisagé l’utilisation de la Glycerine Jelly, désirant comme d’autre l’ont déjà expérimenté, faire les essais avec des colorations diverses préalablement aux inclusions décrites ci-avant.

Amitiés à tous.
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Re: Préparation du pollen

Messagede André » 13 Avr 2012 19:03

Bonjour Jean Pierre

En ce qui concerne la fixation des grains de pollen sur la lame , j'ai remarqué qu'un bon dégraissage à l'alcool les fait adhérer sur la lame. Lorsque le voile blanc commence à se former et à s'étaler, il suffit de laisser sêcher .
Ce séchage fixe les grains. Les lavages à l'alcool ultérieurs en sont facilités car l'on peut faire tomber ensuite l'alcool en gouttes à gouttes en tenant la lame obliquement: les grains ne bougent plus.

Pour la coloration je n'ai que l'expérience des colorants inclus dans de la GG : lorsque la concentration en colorant est trop forte, je rajoute de la GG ou à l'inverse je rajoute du colorant.

PS: je vais essayer de trouver des tulipes dans les jardins du voisinage (dès la tombée de la nuit ) :D :D
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Re: Préparation du pollen

Messagede toucan » 14 Avr 2012 15:00

Bonjour André,

Merci pour tes conseils. :D
Je les ai suivi et en effet après avoir mis 2 ou 3 gouttes d’alcool et attendu leurs parfaits séchages, les pollens adhèrent bien à la lamelle.
J’ai constaté également qu’en fait l’alcool à 96° que j’utilisais ne les titrait plus, (il avait déjà servi plusieurs fois comme bain déshydratant) et c’est pour cela qu’il n’agissait plus comme régressant efficace de la Fuschine. J’ai refait l’essai avec de l’alcool titrant bien 96° et son action est bien réelle.
Par ailleurs j’espère que tu ne t’es pas fait surprendre avec le bouquet de tulipe emprunté à ton voisin. ;)

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Re: Préparation du pollen

Messagede André » 15 Avr 2012 19:38

Par ailleurs j’espère que tu ne t’es pas fait surprendre avec le bouquet de tulipe emprunté à ton voisin. ;)


J'en ai prélevé une dans un bac communal ..discrètement ! :D :D

Il y a effectivement une bonne proportion de grains malformés ou vidés ou avortés.
Par contre tes résultats sont tout à fait corrects ; je ne fais pas mieux.
La surface est ornée d'un réticulum plutôt irrégulier comme le montre ta photo.
Je ne distingue aucun colpus or Beug le classe parmi les Monocolpés.
tulipa_sp.jpg
Exif et Meta MicroCartouche tulipa_sp.jpg (100.77 Kio) Vu 12446 fois


Errata: ne pas tenir compte de l'échelle, l'observation ayant été faite avec un objectif de 25x
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Re: Préparation du pollen

Messagede ralfwagner » 18 Mai 2012 18:03

Bonjour à tous,

um einmal etwas über Pollen zu lernen, habe ich mal Pollenkörner der Hasel präpariert. In Anlehnung an die Beschreibung von André habe ich die Pollenkörner in mit Fuchsin gefärbter Glyceringelatine präpariert. Anders als André habe ich die Glyceringelantine nicht bei Brunel gekauft, sondern nach folgendem Rezept selbst hergestellt:

5 g Blattgelatine (Belbake der Gelita AG)
17,5 ml Wasser
15 ml Glycerin
0,15 g Thymol (antiseptique)
1 Spatelspitze DABCO (1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octan zur pH-Wert Stabilisierung)
2 Tropfen Karbol-Fuchsin nach Ziel-Neesen

Die genaue Vorgehensweise kann im "Kremer: Das große Kosmos Buch der Mikroskopie, Seite 266, Glyceringelatine nach Kisser" nachgelesen werden.

Hier das Ergebnis, Ölimmersion, Stack aus 4 Bildern

Image
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Re: Préparation du pollen

Messagede BINO-BONI » 24 Sep 2012 09:48

Bonjour à tous

Je suis étonné de la différence que l'on peut observer entre les différentes vues du pollen de tulipe ci-dessus. Si les premières à x10 et x20 révèlent peu de détails, la x40 (fushine de ziel) fait exploser l'aplaudimètre pour le finesse des détails et la qualité globale de la préparation. Peut-on dire que la coloration est seule responsable de cette qualité ou d'autres facteurs interviennent? Je suppose que la photo exposée est le résultat d'un FS non?
J'aimerai savoir si certains parmi vous ont essayé les techniques de microscopie minéralogiques ou l'éclairage épiscopique sur le pollen de manière à mieux révéler les détails de texture externe et faciliter le focus stacking?
Merci de vos réponses.
JC
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